《基因工程實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)(第3版)》以基因克隆為主線,實(shí)驗(yàn)內(nèi)容涉及核酸的提取與檢測(cè),靶基因的獲取,基因定點(diǎn)突變、沉默與敲除,質(zhì)粒的重組,原核及真核表達(dá)系統(tǒng)的構(gòu)建與表達(dá),蛋白質(zhì)分析與目標(biāo)產(chǎn)物分離等。每個(gè)實(shí)驗(yàn)板塊由導(dǎo)言、知識(shí)導(dǎo)圖以及5~9個(gè)不同的實(shí)驗(yàn)組成,系統(tǒng)介紹了實(shí)驗(yàn)的相關(guān)基本原理,為同一實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目提供了多種可供選擇的實(shí)驗(yàn)方法,強(qiáng)調(diào)注意事項(xiàng),并對(duì)實(shí)驗(yàn)相關(guān)的內(nèi)容進(jìn)行評(píng)議。第3版還著重?cái)U(kuò)充了基因工程領(lǐng)域的新技術(shù)和新發(fā)展。 《基因工程實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)(第3版)》提供了與教材相結(jié)合的教學(xué)課件、教學(xué)視頻、彩圖、拓展性閱讀材料、實(shí)驗(yàn)儀器、操作要點(diǎn)圖片、實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖片及實(shí)驗(yàn)報(bào)告范本等資源,便于教師教學(xué)和學(xué)生學(xué)習(xí)使用。 《基因工程實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)(第3版)》適用于高等學(xué)校生物技術(shù)、生物工程、生物科學(xué)等相關(guān)專業(yè)本科教學(xué)使用,也可供從事基因工程教學(xué)、科研、生產(chǎn)的工作人員和研究生參考。
實(shí)驗(yàn)計(jì)劃表
導(dǎo)論
第一節(jié) 基因工程的四大要素
第二節(jié) 基因克隆的策略
1 核酸的提取與檢測(cè)
1-1 基因組DNA的提取
1-2 總RNA和mRNA的提取
1-3 噬菌體DNA的提取
1-4 質(zhì)粒DNA的提取
1-5 核酸的檢測(cè)
1-6 脈沖場(chǎng)凝膠電泳
1-7 宏基因組文庫(kù)的構(gòu)建
2 靶基因的獲取
2-1 PCR擴(kuò)增
2-2 目的基因片段的獲取
2-3 探針的標(biāo)記及檢測(cè)
2-4 核酸探針篩選基因文庫(kù)
2-5 反轉(zhuǎn)錄PCR
2-6 RACE方法
2-7 反向PCR
2-8 SiteFinding-PCR
2-9 功能基因的活性篩選
3 基因定點(diǎn)突變、沉默與敲除
3-1 基因定點(diǎn)突變
3-2 基因沉默技術(shù)
3-3 酵母基因的敲除
3-4 哺乳動(dòng)物基因的敲除
3-5 植物基因的敲除
4 質(zhì)粒的重組
4-1 T-A克隆
4-2 感受態(tài)細(xì)胞的制備
4-3 重組質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化
4-4 陽性克隆的篩選
4-5 DNA序列測(cè)定與序列同源性分析
5 原核表達(dá)系統(tǒng)的構(gòu)建與誘導(dǎo)表達(dá)
5-1 DNA的酶切反應(yīng)
5-2 靶DNA片段的分離純化
5-3 DNA片段的連接
5-4 表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建
5-5 Soulhern印跡
5-6 靶基因的誘導(dǎo)表達(dá)
5-7 SDS-PAGE
6 真核表達(dá)系統(tǒng)的構(gòu)建與表達(dá)
6-1 外源基因在酵母中的表達(dá)
6-2 外源基因在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的表達(dá)
6-3 外源基因在植物細(xì)胞中的表達(dá)
6-4 qRT-PCR分析
6-5 Nor-thern印跡
6-6 Western印跡
6-7 熒光原位雜交
7 蛋白質(zhì)的分析與目標(biāo)產(chǎn)物分離
7-1 免疫熒光與激光共聚焦
7-2 雙向電泳
7-3 酵母雙雜交
7-4 蛋白質(zhì)濃度的測(cè)定
7-5 親和層析
參考文獻(xiàn)
附錄1 名詞縮寫
附錄2 實(shí)驗(yàn)操作及儀器使用注意事項(xiàng)
附錄3 如何撰寫實(shí)驗(yàn)報(bào)告
附錄4 常用堿基、氨基酸符號(hào)及緩沖液
附錄5 大腸桿菌基因型
附錄6 實(shí)驗(yàn)儀器