本教材參照我國(guó)農(nóng)業(yè)人才培養(yǎng)目標(biāo)和教學(xué)要求,設(shè)置了核酸提取和檢測(cè),蛋白質(zhì)提取、純化和檢測(cè),目的基因的檢測(cè)及其表達(dá)分析,重組質(zhì)粒的構(gòu)建及其遺傳轉(zhuǎn)化,分子雜交和互作相關(guān)技術(shù)五部分內(nèi)容,包括25個(gè)目前常用的分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。這些實(shí)驗(yàn)技術(shù)比較符合當(dāng)前農(nóng)學(xué)學(xué)科特點(diǎn)和農(nóng)業(yè)科研機(jī)構(gòu)的需求。每個(gè)實(shí)驗(yàn)都包括背景知識(shí)、實(shí)驗(yàn)原理、實(shí)驗(yàn)?zāi)康、?shí)驗(yàn)材料、試劑與儀器、實(shí)驗(yàn)步驟及其解析、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與報(bào)告、思考題、研究案例、附錄、拓展知識(shí)和參考文獻(xiàn)等內(nèi)容。附錄主要介紹實(shí)驗(yàn)室常用溶液和培養(yǎng)基的配制過(guò)程,以期為學(xué)生和實(shí)驗(yàn)員提供方便和較為全面的參考資料。
本教材內(nèi)容適當(dāng),編排合理,專業(yè)適用面寬,適用于農(nóng)學(xué)、植物保護(hù)、園藝、種子科學(xué)與工程、草業(yè)科學(xué)和生物技術(shù)等農(nóng)業(yè)科學(xué)專業(yè)的本科生分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)和初進(jìn)實(shí)驗(yàn)室研究生的實(shí)驗(yàn)參考。
部分 核酸的提取和檢測(cè)
實(shí)驗(yàn)一 植物基因組DNA提取及其檢測(cè)
實(shí)驗(yàn)二 細(xì)菌質(zhì)粒DNA的提取和電泳檢測(cè)
實(shí)驗(yàn)三 植物總RNA提取及其檢測(cè)
實(shí)驗(yàn)四 植物小RNA的提取
第二部分 蛋白質(zhì)提取、純化和檢測(cè)
實(shí)驗(yàn)五 重組蛋白的提取和純化
實(shí)驗(yàn)六 植物總蛋白的提取和電泳檢測(cè)
實(shí)驗(yàn)七 小麥葉片蛋白雙向電泳分析
實(shí)驗(yàn)八 Western印跡法
第三部分 目的基因的檢測(cè)及其表達(dá)分析
實(shí)驗(yàn)九 PCR擴(kuò)增目的基因片段
實(shí)驗(yàn)十 分子標(biāo)記的開(kāi)發(fā)和應(yīng)用
實(shí)驗(yàn)十一 半定量RT-PCR技術(shù)的原理及應(yīng)用
實(shí)驗(yàn)十二 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
實(shí)驗(yàn)十三 基因表達(dá)部位的原位雜交檢測(cè)
實(shí)驗(yàn)十四 亞細(xì)胞定位實(shí)驗(yàn)
第四部分 重組質(zhì)粒的構(gòu)建及其遺傳轉(zhuǎn)化
實(shí)驗(yàn)十五 DNA片段的回收和連接
實(shí)驗(yàn)十六 重組子的轉(zhuǎn)化和藍(lán)白斑篩選
實(shí)驗(yàn)十七 重組質(zhì)粒的酶切驗(yàn)證
實(shí)驗(yàn)十八 農(nóng)桿菌蘸花法轉(zhuǎn)化擬南芥
實(shí)驗(yàn)十九 根瘤農(nóng)桿菌介導(dǎo)的玉米遺傳轉(zhuǎn)化
實(shí)驗(yàn)二十 小麥基因槍轉(zhuǎn)化(瞬時(shí)表達(dá))
第五部分 分子雜交和互作相關(guān)按術(shù)
實(shí)驗(yàn)二十一 利用酵母雙雜交技術(shù)篩選靶蛋白的互作蛋白
實(shí)驗(yàn)二十二 融合蛋白沉降技術(shù)分析蛋白質(zhì)的相互作用
實(shí)驗(yàn)二十三 酵母單雜交系統(tǒng)及其應(yīng)用
實(shí)驗(yàn)二十四 電泳遷移率實(shí)驗(yàn)檢測(cè)蛋白質(zhì)-DNA結(jié)合相互作用
實(shí)驗(yàn)二十五 染色質(zhì)免疫共沉淀